海外科研新進(jìn)展丨MIRA技術(shù)檢測(cè)諾如病毒可視化裝置

《Hybrid paper/PDMS microfluidic device integrated with RNA extraction and recombinase polymerase amplification for detection of norovirus in foods》

期刊名稱(chēng)：《Applied and Environmental Microbiology》

影響因子：3.9

研究團(tuán)隊(duì)：麥吉爾大學(xué)戴維斯夫人研究所病毒性疾病中心

諾如病毒（(HuNoV)）屬于杯狀病毒科，可通過(guò)受污染的食物傳播，是引起急性胃腸炎的主要原因。

加拿大麥吉爾大學(xué)戴維斯夫人研究所病毒性疾病中心聯(lián)合發(fā)表了相關(guān)檢測(cè)研究。課題組開(kāi)發(fā)了一種折紙微流控裝置，使用小鼠諾如病毒1（MNV-1）作為諾如病毒的替代品。該折紙微流控裝置通過(guò)試紙條吸收RNA，使用MIRA多酶恒溫快速核酸擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行RNA擴(kuò)增，以及試紙條橫向流動(dòng)分析。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程和結(jié)果可視化，檢測(cè)在35 min內(nèi)完成，且特異性100%、檢測(cè)限為200 PFU/mL。該裝置在偏遠(yuǎn)和資源環(huán)境中檢測(cè)農(nóng)業(yè)食品中的食源性病毒方面具有巨大的潛力。

實(shí)驗(yàn)方法

纖維素紙條吸收了MNV-1 RNA，隨后將其釋放到MIRA試劑中，RNA首先被逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA），然后擴(kuò)增成雙鏈DNA（dsDNA），接著探針與目標(biāo)序列進(jìn)行了特異性的結(jié)合，堿性四氫呋喃（THF）殘基被內(nèi)切酶IV裂解，使鏈被聚合酶延伸。擴(kuò)增子被捕獲，在T線(xiàn)上產(chǎn)生視覺(jué)信號(hào)。

實(shí)驗(yàn)開(kāi)發(fā)成果

課題組開(kāi)發(fā)了一種折疊的紙/PDMS微流控裝置，該裝置結(jié)合了核酸提取、等溫核酸擴(kuò)增、可視化檢測(cè)多種功能，可以無(wú)縫集成從樣品制備到MNV-1的終點(diǎn)檢測(cè)。

該微流控裝置在35 min范圍內(nèi)完成檢測(cè)，檢測(cè)限均為200 PFU/mL。并且每個(gè)微流控設(shè)備的成本計(jì)算為6.76美元，為課題組目前已知的所有檢測(cè)方法中最便宜的。

實(shí)驗(yàn)價(jià)值

課題組進(jìn)一步評(píng)估了這種微流控裝置在萵苣和覆盆子中檢測(cè)MNV-1的性能，將粗MNV-1 RNA提取物引入新鮮農(nóng)產(chǎn)品樣品中，不需要復(fù)雜的病毒RNA濃度和純化步驟，在生菜中檢測(cè)到170 PFU/g、在樹(shù)莓中檢測(cè)到230 PFU/g。