畜牧業(yè)是全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要組成部分，其中豬、牛、羊的養(yǎng)殖尤為關(guān)鍵。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,動(dòng)物疫病的傳播和防控已成為影響產(chǎn)業(yè)效益的核心問(wèn)題。傳統(tǒng)的病原體檢測(cè)方法雖然有效，但普遍面臨檢測(cè)速度慢、成本高、設(shè)備要求復(fù)雜等挑戰(zhàn)，無(wú)法在養(yǎng)殖場(chǎng)或偏遠(yuǎn)地區(qū)及時(shí)響應(yīng)。 隨著生物技術(shù)的發(fā)展，MIRA技術(shù)（多酶恒溫快速核酸擴(kuò)增技術(shù)）成為疫病防控的有力工具，為養(yǎng)殖場(chǎng)提供了高效、準(zhǔn)確的解決方案。

豬作為全球重要的畜牧動(dòng)物之一，面臨多種病毒、細(xì)菌的威脅，尤其是非洲豬瘟(ASF)近年來(lái)對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大影響。以下是幾種重要的豬病原體：

-豬瘟病毒(CSFV)：高度傳染的病毒性疾病,影響全球養(yǎng)豬業(yè)。豬瘟疫苗的廣泛使用有所緩解,但持續(xù)監(jiān)控是關(guān)鍵。

-非洲豬瘟病毒(ASFV)：近年來(lái)，ASFV的爆發(fā)給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了毀滅性的打擊。由于目前尚無(wú)有效疫苗，早期快速診斷顯得尤為重要。 

-豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)：引發(fā)母豬流產(chǎn)和仔豬呼吸道癥狀，廣泛存在于養(yǎng)豬場(chǎng)中，防控挑戰(zhàn)大。

-豬圓環(huán)病毒(PCV)：廣泛存在，PCV-Ⅱ嚴(yán)重引起免疫抑制，對(duì)養(yǎng)豬場(chǎng)的生產(chǎn)效率有重大影響。 

牛作為乳制品和肉類的主要來(lái)源，其健康直接關(guān)系到畜牧業(yè)的產(chǎn)出與效益。以下是常見的牛病原體: 

-牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)：影響牛的繁殖和免疫功能，感染率高，潛在的經(jīng)濟(jì)損失巨大。

-布魯氏菌(Brucella spp.)：可感染多種動(dòng)物，引發(fā)繁殖問(wèn)題并具有公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)，跨物種傳播對(duì)畜牧業(yè)造成威脅。

-牛結(jié)核病(Bovine Tuberculosis)：傳染性強(qiáng)，涉及人畜共患，且在牛群中的潛伏期長(zhǎng)，防控極具挑戰(zhàn)性。

羊群健康是肉羊、奶羊生產(chǎn)的基礎(chǔ)，常見的病原體包括: 

-小反芻獸疫病毒(PPRV)：影響羊和山羊的高度致命性病毒，廣泛傳播于非洲和亞洲地區(qū)，疫苗普及率不均衡。

-羊支原體肺炎(Mycoplasma pneumonia)：引發(fā)呼吸道疾病，影響羊群的生產(chǎn)效益。

-布魯氏菌(Brucella spp.)：同樣在羊中具有傳播風(fēng)險(xiǎn)，影響繁殖能力，并對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成威脅。 

傳統(tǒng)的病原體檢測(cè)方法如PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))，需要專業(yè)設(shè)備和技術(shù)支持，雖然檢測(cè)靈敏度和特異性較高, 但其局限性顯而易見； 

-時(shí)間耗費(fèi)長(zhǎng)：傳統(tǒng)PCR檢測(cè)往往需要數(shù)小時(shí)甚至數(shù)天才能得出結(jié)果,延遲了疫情控制的最佳時(shí)間窗口。

-設(shè)備依賴性強(qiáng)：PCR等方法需要熱循環(huán)儀等昂貴的設(shè)備,特別是在偏遠(yuǎn)地區(qū)的養(yǎng)殖場(chǎng),技術(shù)和設(shè)備的缺乏成為普及的障礙。

-操作復(fù)雜：需要專業(yè)的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行操作和數(shù)據(jù)分析,增加了檢測(cè)的復(fù)雜性和成本。

-不可現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)：大多數(shù)傳統(tǒng)檢測(cè)方法要求樣本必須送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析，這樣的操作流程延長(zhǎng)了從采樣到結(jié)果的時(shí)間。 

上述因素在重大疫情暴發(fā)時(shí)尤其明顯，如非洲豬瘟的蔓延，傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)往往無(wú)法及時(shí)應(yīng)對(duì)，導(dǎo)致大范圍的疫情擴(kuò)散。

多酶恒溫快速核酸擴(kuò)增技術(shù)(MIRA)的原理與優(yōu)勢(shì) 

1.工作原理：MIRA(Multi-enzyme Isothermal Rapid Amplification)技術(shù)依靠多種功能蛋白在常溫下協(xié)同作用,實(shí)現(xiàn)核酸的快速擴(kuò)增, 是能夠真正實(shí)現(xiàn)便攜式的現(xiàn)場(chǎng)快速核酸檢測(cè)技術(shù)。

2.與傳統(tǒng)PCR相比的優(yōu)勢(shì)

-更快的檢測(cè)速度：MIRA技術(shù)可以在5分鐘至20分鐘內(nèi)完成擴(kuò)增，相較于PCR的數(shù)小時(shí)反應(yīng)時(shí)間，顯著提高了檢測(cè)效率。

-無(wú)需昂貴設(shè)備：MIRA技術(shù)在恒溫下完成反應(yīng)，不需要復(fù)雜的熱循環(huán)儀，只需簡(jiǎn)單的恒溫裝置即可操作，適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和移動(dòng)檢測(cè)。

-操作簡(jiǎn)便：MIRA技術(shù)無(wú)需專業(yè)的實(shí)驗(yàn)操作技能，養(yǎng)殖場(chǎng)主和技術(shù)員經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單培訓(xùn)即可使用，大大降低了人力成本。

-適應(yīng)性強(qiáng)：MIRA技術(shù)可以在多種環(huán)境下進(jìn)行檢測(cè)，不受復(fù)雜實(shí)驗(yàn)室條件的限制，特別適合遠(yuǎn)程和資源有限的地區(qū)。

3.MIRA技術(shù)在病原體快速檢測(cè)中的應(yīng)用：通過(guò)對(duì)常見病原體的快速檢測(cè)，MIRA技術(shù)可以在動(dòng)物出現(xiàn)臨床癥狀之前及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在的感染源，幫助養(yǎng)殖場(chǎng)主采取早期防控措施。尤其是在重大疫情如非洲豬瘟或布魯氏菌病的爆發(fā)時(shí)，MIRA技術(shù)提供了一種便捷且高效的檢測(cè)方式。

實(shí)驗(yàn)操作

-實(shí)驗(yàn)所需工具

-實(shí)驗(yàn)操作步驟

1.取出快速核酸釋放劑（根據(jù)檢測(cè)病毒所屬DNA型/RNA型的不同，選擇不同的釋放劑）

2.將部分核酸釋放劑，放入采樣管中。

3.準(zhǔn)備進(jìn)行拭子采樣（口腔、鼻腔......），口腔采樣前2h，禁止入食。

4.在鼻腔/口腔處旋轉(zhuǎn)10-20次，采樣完畢后，將拭子頭部折斷，放入采樣管中。

5.顛倒混勻，靜置5min后，得到樣本裂解液。

6.樣本處理后，操作臺(tái)進(jìn)行消殺。

7.取出安普未來(lái)生物成品檢測(cè)試劑盒，試劑為全凍干體系（酶凍干＋buffer微球），如需液體buffer，需要按照試劑產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行配置。

8.剪下所需數(shù)量的凍干微球試劑反應(yīng)管（常規(guī)為8連排；需要做陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照，管蓋上進(jìn)行標(biāo)記）

9.打開管蓋，加入樣本裂解液。（可查看試劑復(fù)溶狀態(tài)）

10.上下顛倒混勻8-10次，進(jìn)行充分混勻

11.打開數(shù)字化恒溫檢測(cè)儀，開蓋放入反應(yīng)管，點(diǎn)擊右側(cè)開關(guān)，點(diǎn)擊加熱按鈕。

12.運(yùn)行4min響起提示音，取出試劑，再上下顛倒混勻8-10次，放入原方向原位置反應(yīng)倉(cāng)。

13.再次16min后擴(kuò)增完成，查看結(jié)果。