DNA 恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型）

【原理概述】 

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下（一般為 39 ºC~42 ºC）， 在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白的幫助下，重組酶和引物形成復(fù)合體；進(jìn)行同源搜索并結(jié)合目的同源域，此時(shí)在該同源位置形成D-loop 區(qū)并開(kāi)始進(jìn)行鏈交換；伴隨著重組酶從復(fù)合體上解離，聚合酶也結(jié)合到引物的 3’末端，開(kāi)始鏈的延伸。依賴nfo 酶的作用，加入根據(jù)模板設(shè)計(jì)的特異的分子探針，使用膠體金技術(shù)（三明治夾心法）可以對(duì)最終結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)。

【產(chǎn)品特點(diǎn)】 

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí) 間短（僅需 15 min）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。 本試劑對(duì)設(shè)備要求低，金屬浴、水浴鍋等即 可進(jìn)行反應(yīng)操作，無(wú)需購(gòu)買 PCR 擴(kuò)增儀等 價(jià)格高昂的專屬設(shè)備。

【引物設(shè)計(jì)】 

建議使用長(zhǎng)度在30-35 bp 的引物，引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度；下游引物的 5’端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán)（常用生物素）。引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；擴(kuò) 增子長(zhǎng)度建議在150-500 bp。

【膠體金探針設(shè)計(jì)】

在上下游引物中間，設(shè)計(jì)一段長(zhǎng)度為46-52nt 與目的片段互補(bǔ)的序列；5’端修飾一個(gè)抗原 標(biāo)記（典型 FAM）；在 5’端和 3’末端的中部 位置標(biāo)記一個(gè) dSpacer（四氫呋喃，THF）， 作為 nfo 的識(shí)別位點(diǎn)；3’末端標(biāo)記一個(gè)修飾 基團(tuán)，例如胺基、磷酸基團(tuán)或 C3-Spacer 等。

【試劑盒儲(chǔ)存】 

1．儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 °C 恒溫環(huán)境， 避光保存，避免重壓； 

2．產(chǎn)品有效期：14 個(gè)月； 

3．生產(chǎn)日期見(jiàn)外包裝。

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【注意事項(xiàng)】

1. 使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照操 作步驟進(jìn)行操作；

2. 樣品處理應(yīng)該嚴(yán)格按照生物安全規(guī)范操 作，在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免核酸污染，并設(shè)置空白對(duì)照；

3. 使用時(shí)請(qǐng)取出實(shí)驗(yàn)所需的MIRA 反應(yīng)單元的數(shù)量，剩余分請(qǐng)置于存儲(chǔ)條件下； 

4. 使用有效期內(nèi)試劑，且各組分不得與其他批號(hào)的相應(yīng)成分混用。